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biochain Z5030012說明書

更新時間：2020-07-21 點擊次數(shù)：2747

biochain Z5030012說明書

Malachite Green Phosphate Assay Kit

孔雀石綠磷酸鹽檢測試劑盒

總覽

BioChain的孔雀石綠磷酸鹽檢測試劑盒基于對孔雀石綠，鉬酸鹽和游離正磷酸鹽之間形成的綠色絡(luò)合物的定量分析。通過分光光度計（600 – 660 nm）或酶標儀可以方便地測量反應(yīng)迅速形成的顏色。非放射性比色測定試劑盒已經(jīng)過優(yōu)化，可提供出色的靈敏度和更長的保存期限。該測定方法簡單，快速，只需一個添加步驟即可測定磷酸鹽?？梢栽谠嚬?，比色皿或多孔板中進行測定?？梢栽?6和384孔板中方便地進行測定，以高通量篩選酶抑制劑。

描述

BioChain的基于細胞的測定試劑盒可滿足制藥和生物技術(shù)客戶不斷增長的需求，這些需求源于從基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)衍生出來的大量藥物靶標。我們的客戶正在尋求在基于細胞的系統(tǒng)中進行大規(guī)模篩選，因為準確而完整的細胞數(shù)據(jù)很有希望并可以代表生物的生理狀況。該試劑盒配有用于該測定的所有試劑的完整系統(tǒng)和易于遵循的方案

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒 (Z5030012)

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒是基于對孔雀綠、鉬酸鹽和游離正磷酸鹽之間形成的綠色復(fù)合物進行定量。可在分光光度計 (600-660 nm) 或酶標儀上方便地測定反應(yīng)快速顯色。對非放射性比色測定試劑盒進行了優(yōu)化，以提供*的靈敏度和延長的有效期。該測定法簡單、快速，涉及磷酸鹽測定的單個加入步驟?？稍谠嚬?、比色皿或多孔板中執(zhí)行測定。該試驗可方便地在 96 孔和 384 孔板中進行，用于高通量篩選酶抑制劑。

關(guān)鍵特征

試劑非常穩(wěn)定。由于我們的創(chuàng)新配方，不會發(fā)生試劑沉淀。因此，測定前無需過濾試劑，這是其他市售試劑盒的常見要求。

高靈敏度和寬檢測范圍：檢測低至 1.6 pmole 的磷酸鹽，有效范圍為 0.02 M 至 40 M 磷酸鹽。

快速方便：均勻的“混合和測量”測定法可在 20 min 內(nèi)定量測定游離磷酸鹽。

與常規(guī)實驗室和 HTS 格式兼容：可在試管、比色皿或微孔板、分光光度計和酶標儀上進行測定。

在 96 孔和 384 孔板中觀察到穩(wěn)健且適用于 HTS：Z' 因子為 0.7-0.9。可在 HTS 液體處理系統(tǒng)上輕松實現(xiàn)自動化。

應(yīng)用

磷酸酶測定：從肽、蛋白質(zhì)或小分子底物中釋放磷酸鹽。

脂肪酶測定：從磷脂中釋放磷酸鹽

核苷三磷酸酶測定：從核苷三磷酸鹽（ATP、GTP、TTP、CTP 等）中釋放磷酸鹽。

磷脂、蛋白質(zhì)和 DNA 等中磷酸鹽的定量

藥物發(fā)現(xiàn)：高通量篩選磷酸酶抑制劑。

試劑盒內(nèi)容物：在 96 孔板中進行 2,500 次測定

試劑 A：50 mL 試劑 B：1 mL 標準品：1 mL 1 mM 磷酸鹽

儲存條件。試劑和標準品在 4 ℃ 下可穩(wěn)定儲存 1 年。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時，應(yīng)采取實驗室試劑的常規(guī)預(yù)防措施。詳細信息請參見材料安全數(shù)據(jù)表。

使用 96 孔板的程序

試劑制備。每次測定需要 20 L 工作試劑。通過混合 100 vol 試劑 A 和 1 vol 試劑 B（例如 5 mL 試劑 A 和 50 μL 試劑 B）制備足量的工作試劑。工作試劑在室溫下可穩(wěn)定儲存至少 1 天。

重要提示：使用前必須將試劑恢復(fù)至室溫。每次測定前，重要的是檢查所有酶制劑和測定緩沖液中均不含游離磷酸鹽。向 80µL 樣品溶液中加入 20µL 工作試劑可方便地完成該操作。在 620 nm 處的空白 OD 值應(yīng)低于 0.2，如果 OD 讀數(shù)高于 0.2，檢查磷酸水水平。雙蒸水的 OD 讀數(shù)通常低于 0.1。實驗室清潔劑可能含有高水平的磷酸鹽。*清洗后，確保實驗室器具不污染磷酸鹽。

磷酸鹽標準品的制備。通過移取 40 L 1 mM 磷酸鹽標準品，置于 960 L 蒸餾水或酶反應(yīng)緩沖液中，制備含 40 M 磷酸鹽的預(yù)混溶液。試管編號。

按下表所示稀釋標準品。移取 80 L 標準品，一式兩份，置于透明底 96 孔板的孔中。加入僅含水或反應(yīng)緩沖液的空白對照。

No	預(yù)混劑 + H2O	終體積 (mL)	磷酸鹽濃度 (M)	pmoles 磷酸鹽 in 50 mL
1	200mL + 0mL	200	40	2,000
2	160mL + 40mL	200	32	1,600
3	120mL + 80mL	200	24	1,200
4	80mL + 120mL	200	16	800
5	60mL + 140mL	200	12	600
6	40mL + 160mL	200	8	400
7	20mL + 180mL	200	4	200
8	0mL + 200mL	200	0	0

2. 將 80µL 供試品轉(zhuǎn)移至平板的不同孔中。

注：在酶反應(yīng)的情況下，可通過加入特定抑制劑終止反應(yīng)，或通過加入工作試劑直接終止反應(yīng)。試驗前可能需要稀釋反應(yīng)混合物（見一般注意事項）。對于 ATP 酶或 GTP 酶測定，ATP 或 GTP 濃度應(yīng)低于 0.25 mM，如果反應(yīng)混合物含有 > 0.25 mM 的 ATP 或 GTP，則用蒸餾水稀釋樣品。例如，如果 ATP 酶反應(yīng)含有 1 mM ATP，則在反應(yīng)結(jié)束時，在測定前用水將反應(yīng)混合物稀釋 4 倍。

向各孔中加入 20µL 工作試劑。輕敲微孔板輕輕混勻。

4. 室溫下孵育 30 min，顯色。

5. 在酶標儀上測定 600 nm-660 nm (620 nm) 處的吸光度。

對于 384 孔板中的測定，程序相同，只是標準品溶液和樣品溶液的體積應(yīng)為 40 L，工作試劑的體積應(yīng)為 10 L。

圖。96 孔板磷酸鹽標準曲線。孵育 30 min 后，讀取 620 nm 處的 OD。數(shù)據(jù)表示為平均 SD (n = 2)。有效檢測范圍為 0.02-40 M 磷酸鹽。

一般考慮

孵育時間。顯色反應(yīng)在室溫下 30 min 內(nèi)完成。在 30 min 時讀取 OD 值。

在高濃度磷酸鹽 (> 100 M) 或存在高濃度蛋白質(zhì)和金屬（例如）的情況下，可能發(fā)生沉淀。

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒

如果發(fā)生沉淀，在 H2O 中對樣品進行系列稀釋，運行試驗并測定無沉淀孔的稀釋因子。使用稀釋樣品重復(fù)測定。

酶反應(yīng)緩沖液。由于任何外源性游離磷酸鹽均會干擾試驗，因此確保試驗中使用的蛋白制備液、反應(yīng)緩沖液和實驗室器具不應(yīng)含有游離磷酸鹽非常重要。這可以通過向緩沖液中加入工作試劑并測量顏色形成來方便地檢查。

液體處置。含量測定混合物含 0.4 M 硫酸。建議在處置前用等體積的 1 NNaOH 中和廢液。

數(shù)據(jù)分析

以 OD620 nm 對磷酸鹽標準品濃度作圖。根據(jù)標準曲線測定樣品磷酸鹽濃度。

文獻

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高通量篩選

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蛋白質(zhì)和 DNA 中的磷酸酶、脂肪酶/磷脂、核苷三磷酸酶和磷酸鹽分析

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技術(shù)說明

孔雀綠磷酸鹽檢測試劑盒已經(jīng)過優(yōu)化和配制，以提供靈敏、方便和穩(wěn)健的定量測定從酶反應(yīng)和天然來源中釋放的游離磷酸鹽。試劑盒的關(guān)鍵特征如下：

試劑非常穩(wěn)定。由于我們的創(chuàng)新配方，不會發(fā)生試劑沉淀。因此，測定前無需過濾試劑，這是其他市售試劑盒的常見要求。

安全。非放射性試驗。

高靈敏度和寬檢測范圍：僅檢測 1.6 pmole 磷酸鹽和 0.02 M 至 40 M 磷酸鹽。

快速方便：均勻的“混合和測量”測定法可在 20 min 內(nèi)定量測定游離磷酸鹽。

與常規(guī)實驗室和 HTS 格式兼容：可在試管或微孔板、分光光度計和酶標儀上進行測定。

在 96 孔和 384 孔板中觀察到穩(wěn)健且適用于 HTS：Z' 因子為 0.7-0.9?？稍?HTS 液體處理系統(tǒng)上輕松實現(xiàn)自動化。

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