全國服務咨詢熱線:
15921799099
15921799099
第一部分：產品描述與基本概況
1. 產品基本信息
在當今蛋白質組學迅猛發展的時代，我們將目光聚焦于一種在生命科學研究中被無數科研人員奉為“黃金標準"的核心工具酶——測序級修飾胰蛋白酶（Sequencing Grade Modified Trypsin）。本款產品由生物技術企業 Promega（普洛麥格） 傾力打造，專為追求實驗數據的高通量測序實驗室與蛋白質譜平臺量身定制。
• 品牌名稱：Promega / 普洛麥格
• 通用英文品名：Sequencing Grade Modified Trypsin, Porcine (lyophilized)
• 中文譯名：測序級修飾豬胰蛋白酶（凍干粉形式）
• 核心貨號：V5111
• 產品規格：本貨號（V5111）包裝內包含 5 支獨立小瓶，每瓶內含 20μg 高純度酶凍干粉，總計 100μg 酶量。此外，包裝內還隨附了一支 1ml 的專用重懸緩沖液（Trypsin Resuspension Dilution Buffer，組分號：V542A）。
• 適用場景：非變性條件下的標準過夜消化、SDS-PAGE電泳后的膠內蛋白提取與消化、復雜多肽圖譜構建、抗體藥物表征、翻譯后修飾位點挖掘等幾乎所有涉及蛋白降解的實驗場景。
該產品的存在，本質上是為了解決傳統野生型胰蛋白酶在精密分析儀器面前表現出的“不穩定性"和“不可控性"。它不僅僅是一種簡單的生化試劑，更是連接蛋白質宏觀結構與微觀序列信息的橋梁。
第二部分：產品核心優勢與技術突破
1. 根本性突破：還原甲基化修飾（Reductive Methylation）阻斷自水解
野生型胰蛋白酶雖然能夠特異性切割賴氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）殘基的羧基端肽鍵，但它自身也是一個蛋白質。在 37℃ 的溫育環境中，它極易發生“自食其力"的現象，即自我水解（Autolysis）。
自我水解會帶來兩個致命的實驗隱患：首先，它會消耗掉大量昂貴的酶，導致原本應該作用于目標底物蛋白的酶量不足，造成消化不全；其次，也是最致命的一點，自我水解產生的酶切片段會干擾后續的蛋白質測序、高效液相色譜（HPLC）分離以及液質聯用（LC-MS/MS）分析。這些自我水解的副產物在數據庫中往往無法被匹配，或者直接掩蓋了真正目標蛋白的信號峰。
Promega 的這款 V5111 產品，利用先進的化學還原甲基化技術，對豬源胰蛋白酶中的賴氨酸殘基進行了共價修飾。這種分子層面的外科手術般的處理，封閉了胰蛋白酶自身的切割位點，使其具備了強的抗水解能力。在嚴謹的功能穩定性測試中，經過這種修飾的酶在 37℃ 下持續孵育 3 小時后，其殘留的生物活性依然是普通未修飾酶的 2 倍以上。這意味著，在整個長達數小時的過夜消化過程中，酶分子本身始終保持著堅挺的結構完整性，不會中途“自爆"。
2. 專一性保障：TPCK 處理與親和層析雙純化
除了防止自水解，另一個困擾研究者的問題是“偽胰蛋白酶（Pseudotrypsin）"的出現。在特定的反應條件下，野生型胰蛋白酶可能發生構象改變，從而表現出類似胰凝乳蛋白酶（Chymotrypsin）的底物特異性，開始胡亂切割苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基。這種意料之外的切割行為，會將一條原本可以預測的肽鏈切得支離破碎，給后續的數據搜庫和序列拼接帶來極大的困擾。
為了解決這個問題，本產品在出廠前經過了嚴格的對甲苯磺酰-L-賴氨酰-氯甲基酮（TPCK）處理。TPCK 是一種特異性強的烷基化抑制劑，它能夠精準地滅活混在其中的微量胰凝乳蛋白酶活性，確保最終交付給您的酶制劑只有單一的賴氨酸/精氨酸切割能力。在此基礎之上，研發團隊還引入了親和層析技術，對酶進行進一步的提純。多重凈化工藝的加持，使得該酶制備物的純度達到了令人驚嘆的水平，極大地保證了每一批次、每一次實驗所產出數據的一致性與可重復性。
3. 環境耐受性與操作彈性
高質量的科研往往需要面對各種復雜的樣本基質。本款測序級修飾胰蛋白酶展現出了魯棒性（Robustness）。它不僅能適應標準的無鹽或低鹽緩沖體系，還能耐受輕度變性條件。例如，在含有 0.1% SDS、1M 尿素或者 10% 乙腈的反應體系中，它依然能維持高水平的活性。即便是面對高達 2M 濃度的鹽酸胍這種強變性劑，它仍能保留約 50% 的催化能力。這種廣泛的耐受性，為您在處理一些難溶性膜蛋白或高度折疊的包涵體蛋白時，提供了更多的緩沖液配方選擇空間。
第三部分：作用機理與酶切特性深度剖析
1. 底物識別密碼
作為絲氨酸蛋白酶家族的重要成員，本產品嚴格遵循經典的“剪刀手"法則：它只識別蛋白質一級結構中賴氨酸（Lys, K）和精氨酸（Arg, R）殘基的羧基端肽鍵，并在此處將其切斷。這一明確的切割規律，使得生成的肽段長度適中（通常為 6-20 個氨基酸殘基），極其適合反相色譜柱的分離以及質譜儀的離子化檢測。
2. 必須警惕的“避坑"區域：脯氨酸效應
盡管該酶的特異性高，但在自然界千變萬化的蛋白質序列面前，它也有“束手無策"的時候。如果賴氨酸或精氨酸殘基的緊鄰 C 端（即下一個氨基酸）是脯氨酸（Proline, P），那么形成的肽鍵（Lys-Pro 或 Arg-Pro）將對胰蛋白酶產生強的抗性。這是由于脯氨酸獨特的環狀側鏈結構，像一把鎖一樣緊緊扣住了主鏈，導致酶的催化口袋無法順利插入并進行切割。因此，如果您的研究對象富含脯氨酸結構域（例如膠原蛋白或某些信號肽），在使用本產品時需要額外關注這種潛在的切割盲區，或者考慮引入其他輔助蛋白酶進行聯合消化。
3. 酸堿環境的微妙博弈
酶的活性中心對環境 pH 值極度敏感。本品的最適反應 pH 范圍為 7.0 至 9.0。在實際實驗中，推薦使用 50mM 碳酸氫銨（NH4HCO3, pH 7.8）作為標準反應緩沖液。碳酸氫銨不僅是酶發揮活性的溫床，更有一種“自帶退場機制"的優點：在后續樣本的蒸干步驟中，碳酸氫銨極易受熱分解為氨氣、二氧化碳和水蒸氣而揮發殆盡，不會像磷酸鹽或其他無機鹽那樣在質譜進樣口處形成惱人的鹽分結晶，從而保護了昂貴的質譜儀，也提高了低豐度肽段的離子化效率。
第四部分：實驗應用場景與實操全流程指南
為了讓這款*的工具發揮出最大的效能，以下為您梳理了在不同實驗范式下的標準化操作流程。
場景一：SDS-PAGE 膠內蛋白點的酶解（適用于二維電泳或單向膠點挑選）
這是蛋白質組學中經典的樣本前處理步驟。
第一步：蛋白質的還原與烷基化（打開二硫鍵，防止復性）
將切下的蛋白凝膠塊放入潔凈的 PCR 管或低吸附 EP 管中，加入足量的 100% 乙腈（ACN）使膠塊脫水變白，吸去液體。隨后加入適量現配的 10mM 二硫蘇糖醇（DTT）溶液（溶于 25mM 碳酸氫銨），在 56℃ 水浴或金屬浴中孵育 45 分鐘至 1 小時，目的是打斷蛋白內部的二硫鍵。冷卻至室溫后，吸去 DTT 溶液，加入等量現配的 55mM 碘乙酰胺（IAA）溶液（同樣溶于 25mM 碳酸氫銨），在避光條件下室溫孵育 30 分鐘。這一步是為了讓打開的半胱氨酸巰基被烷基化，防止其重新氧化形成雙硫鍵。
第二步：脫色與清洗
孵育結束后，吸去液體，依次用雙蒸水和 25mM 碳酸氫銨、乙腈交替洗滌膠塊，直至考馬斯亮藍染料全褪去。再次用乙腈脫水使膠塊變白，真空抽干或在常溫通風櫥內自然風干。
第三步：酶液的配制與加樣
取出一支本產品（V5111）的小瓶，短暫離心使粉末沉底。加入隨附的重懸緩沖液（V542A）或 50mM 乙酸（HAc）/ 1mM 鹽酸（HCl），輕柔吹打或渦旋重溶，推薦濃度為 0.1-0.2 μg/μL。將配置好的酶液按體積加入干燥好的膠塊中（通常每管加入 10-20 μL，以剛好沒過膠塊為宜）。將管子置于冰盒上，在 4℃ 冰箱中放置 30 至 60 分鐘。這個低溫浸泡的過程是為了讓胰蛋白酶分子充分擴散至凝膠的多孔網狀結構中。
第四步：過夜消化與肽段萃取
待膠塊將酶液全吸干后，向管中加入少量不含酶的 25mM 碳酸氫銨緩沖液（約 20-30 μL），確保膠塊始終處于濕潤狀態。密封管蓋，置于 37℃ 恒溫培養箱或搖床中，低速振蕩孵育 16 至 18 小時（即標準的過夜消化）。
次日，吸取上清液轉移至新的低吸附管中。再向原膠塊中加入 50% 乙腈 / 5% 甲酸混合液，超聲 5-10 分鐘，吸取液體與上清合并。重復此萃取步驟 1-2 次以確保肽段被洗脫。將收集到的所有萃取液合并，置于離心濃縮儀（Vacufuge）中抽干。最終，用 0.1% 甲酸水溶液（FA）將干燥好的肽段復溶，即可上樣至 LC-MS/MS 系統進行串聯質譜分析。
場景二：溶液態蛋白的直接酶解（適用于純化蛋白或細胞裂解液）
第一步：底物預處理
對于溶液中的蛋白質，直接調整溶液成分，使其最終濃度為 2M 尿素或 0.1% Rapigest/ProteaseMAX 等去污劑（如需增強溶解度），并用 50mM 碳酸氫銨調節 pH 至 8.0 左右。
第二步：酶量配比控制
建議的蛋白酶與底物蛋白質量比為 1:100 到 1:20（w/w）。例如，如果您有 100 μg 的目標蛋白，則需加入 1 μg 至 5 μg 的本產品。
第三步：反應終止
在 37℃ 孵育 4 至 16 小時后，可以通過物理降溫（置于 -20℃ 或 -80℃ 冷凍）或化學法（加入TFA 使終濃度達到 0.1%-1%，將環境 pH 強行降低至 4.0 以下）來瞬間終止酶的催化活性。
第五部分：常見實驗疑難排障與實戰解決方案
在日復一日的枯燥實驗中，即便使用了頂級的試劑，偶爾也會遇到不盡人意的跑膠結果。以下是基于數萬名一線科研人員的真實反饋整理而成的排障指南。
問題一：質譜鑒定出的肽段覆蓋率極低，或者根本搜不到庫
這通常是酶解不充分的典型癥狀。請首先檢查您的樣本是否發生了嚴重的蛋白質聚集。如果樣本是高疏水性的膜蛋白，建議在緩沖液中提高有機相（如乙腈）的比例至 10%-20%，或者使用 SDC（十二烷基-β-D-麥芽糖苷）等兼容性更好的綠色去污劑。其次，確認重懸酶的溶劑是否正確，嚴禁使用堿性過強的 Tris 或磷酸鹽緩沖液，這可能會破壞酶的活性中心構象。
問題二：質譜原始圖譜中出現大量雜亂的低分子量雜峰，干擾主峰判斷
這通常意味著酶液發生了自水解或者被外源性蛋白酶污染。請務必確認您使用的是經過 TPCK 處理的產品（如本款 V5111）。另外，在實驗過程中要嚴防細菌污染，因為細菌分泌的蛋白酶威力驚人。如果必須進行超過 24 小時的超長時孵育，建議在反應體系中加入少許疊氮鈉（NaN3）抑菌劑。
問題三：樣本在離心管壁上發生嚴重的非特異性吸附，導致回收率慘不忍睹
蛋白質，尤其是帶有正電荷的胰蛋白酶切肽段，極易吸附在普通的聚丙烯塑料管壁表面。強烈建議您在進行酶解和萃取步驟時，全程使用經硅烷化處理或低吸附涂層的專用離心管。此外，在上機前的復溶階段，務必保證甲酸濃度維持在 0.1%，酸性的環境能有效屏蔽管壁上的負電荷，減少肽段的“掛壁"流失。
第六部分：儲存與活性維護鐵律
酶的保質期與活性是實驗成功的基石。請嚴格遵守以下儲存規范：
1. 凍干粉形態儲存：收到貨后，未開封的小瓶應直立放置在 -20℃ 的冰箱中。該產品在 -20℃ 的干燥環境下極為穩定，有效期通常長達數年（具體請參見瓶身標簽）。
2. 重懸液的分裝與保存：一旦您使用緩沖液將凍干粉溶解，嚴禁反復凍融。請立即將其按單次使用的需求量（如每管 5 μL 或 10 μL）進行微量分裝，轉移至預冷的低吸附管中，迅速置于 -70℃ 的超低溫冰箱。在 -70℃ 環境下，重懸后的酶液可穩定保存至少 1 個月。本產品的晶體結構異常穩固，數據顯示其甚至可耐受多達 5 次的凍融循環而不損失顯著活性，但為了您數據的絕對嚴謹，我們仍建議嚴格執行單次分裝原則。
關鍵詞：測序級修飾胰蛋白酶、Promega V5111、豬源測序級胰酶、質譜級胰蛋白酶、膠內蛋白消化、蛋白多肽圖譜、TPCK處理胰蛋白酶、還原甲基化胰蛋白酶、液相色譜質譜樣品前處理、蛋白質組學試劑、蛋白測序級酶切、LC-MS/MS樣本制備、V5111 說明書、高特異性蛋白酶、胰蛋白酶自水解抑制、生物制藥蛋白表征、抗體藥物酶解、SDS-PAGE膠點提取、測序級蛋白酶供應商、Promega 蛋白酶產品
更多產品信息，請聯系中國區域代理商：上海起發實驗試劑有限公司
（注：本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）
??熱賣產品
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
E6120 | ONE-Glo™ Luciferase Assay System | 100ml | Promega |
V5111 | Sequencing Grade Modified Trypsin | 5x20ug | Promega |
H5135 | Tris Base, Molecular Biology Grade | 2500g/瓶 | Promega |
V5113 | Sequencing Grade Modified Trypsin | 5*20ug | Promega |
V1062 | Chymotrypsin, Sequencing Grade | 4*25ug | Promega |
V5072 | Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade | 100ug | Promega |
V5117 | Sequencing Grade Modified Trypsin | 1*100ug | Promega |
E2620 | Bright-Glo™ Luciferase Assay System | 100mL | Promega |
V7820 | High Capacity Magne® Streptavidin Beads | 3ml | Promega |
V1621 | Asp-N, Sequencing Grade | 2ug | Promega |
VA1170 | native-lysc-and-lysn | 20ug | Promega |
G7571 | CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay | 10 × 10ml | Promega |
E2920 | Dual-Glo® Luciferase Assay System | 10ml | Promega |
G7940 | Bio-Glo™ Luciferase Assay System | 100ml | Promega |
V6962 | UDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay | 400 assays | Promega |
G7573 | CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay | 10 × 100ml | Promega |
V5071 | Trypsin / Lys-C Mix, Mass Spec Grade | 20ug | Promega |
G7572 | CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay | 100ml | Promega |
N1120 | Nano-Glo® Luciferase Assay | 100ml | Promega |
G7570 | CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay | 10ml | Promega |
E8130 | ONE-Glo™ EX Luciferase Assay Sy | 10X10ml | Promega |
V1651 | Glu-C, Sequencing Grade | 50ug (5 × 10ug) | Promega |
V1671 | rLys-C, Mass Spec Grade | 15ug | Promega |
V5280 | Trypsin Gold, Mass Spectrometry Grade | 100ug | Promega |
G1780 | CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay | 1000assays | Promega |
V4831 | PNGase F | 500u | Promega |
E1910 | Dual-Luciferase® Reporter Assay System | 100assays | Promega |
M1705 | M-MLV Reverse Transcriptase Protocol | 50000U | Promega |
V1881-10ug | Arg-C 酶 | 10ug | Promega |
G3581 | CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay | 5,000 assays | Promega |
VA1160 | rAsp-N, Mass Spec Grade | 10ug | Promega |
G3580 | CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) | 1,000 assays | Promega |
LS2052 | Eastep™ RT Master Mix (5X) | 200 reactions | Promega |
V3121 | Agarose, LE, Analytical Grade | 100g | Promega |
G8091 | Caspase-Glo® 3/7 Assay System | 10ml | Promega |
N1662 | NanoBRET™ Nano-Glo® Detection Systems | 1000assays | Promega |
V5011 | AMP-Glo™ Assay | 1000 Assays | Promega |
L5070 | Transcend™ Colorimetric Non-Radioactive Translation Detection System *（L5072+L5061） | 30 reactions | Promega |
E2610 | Bright-Glo™ Luciferase Assay System | 10ml | Promega |
A6002 | GoTaq® qPCR Master Mix | 1,000 X 50ul reactions | Promega |
V5073 | Trypsin / Lys-C Mix, Mass Spec Grade | 5*20ug | Promega |
E2311 | FuGENE® HD Transfection Reagent | 1ml | Promega |
N3040 | Nano-Glo® HiBiT Lytic Detection System | 10ml/100ml | Promega |
D1521 | Unmethylated Lambda DNA | 250UG | Promega |
V7511 | IdeS Protease | 5,000 units | Promega |
N1091 | Promoter-Driven Control NanoLuc® Luciferase Vectors | 20ug | Promega |
L4540 | Flexi® Rabbit Reticulocyte Lysate System | 30reactions | Promega |
VA2161-5ug | ProAlanase, Mass Spec Grade, (0?2ug?ul) | 5ug | Promega |
G3582 | CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay System Technical Bulletin | 200次檢測,4ml（2個96孔板的量） | Promega |
G9683 | CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay | 100ml | Promega |
N2511 | RNasin Ribonuclease Inhibitor Recombinant Protocol | ea | Promega |
LS1040 | Eastep™ Super Total RNA Extraction Kit | 50 preps | Promega |
N2515 | rRNasin RNase Inhibitor | 10,000u | Promega |
P1712 | Ribo m7G Cap Analog | 25 A254 units | Promega |
N2611 | RNasin® Plus Ribonuclease Inhibitor | 2500u | Promega |
G9241 | CellTiter-Glo® 2.0 Cell Viability Assay | 10ml | Promega |
V9102 | ADP-Glo™ Kinase Assay | 10,000 Assays | Promega |
P1043 | VivoGlo™ Luciferin, In Vivo Grade | 1g | Promega |
E1501 | Luciferase Assay System, 10-Pack | 1,000assays | Promega |
G9072 | NAD/NADH-Glo™ Assays | 50ml | Promega |
G8093 | Caspase-Glo® 3/7 Assay System | 10*10ml | Promega |
V8911 | P450-Glo™CYP3A4 Assay (Luciferin-PPXE)DMSO-Tolerant Assay | 10ml | Promega |
G7941 | Bio-Glo™ Luciferase Assay System | 10ml | Promega |
V1061 | Chymotrypsin, Sequencing Grade | 25ug | Promega |
V1891 | Elastase | 5mg | Promega |
E2510 | Steady-Glo® Luciferase Assay System | 10ml | Promega |
G8781 | Magne™ Protein A Beads, 20％ Slurry | 1ml | Promega |
P1300 | RiboMAX™ Large Scale RNA Production Systems—SP6 and T7 Technical Bulletin | 1system | Promega |
E1320 | pGL4.51[luc2/CMV/Neo] Vector Protocol | 20ug | Promega |
G9291 | CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay | 5×10 ml | Promega |
E1200 | ProFection® Mammalian Transfection System | 40reactions | Promega |
M7401 | GoTaq® G2 Hot Start Taq Polymerase | 100u | Promega |
D6001 | GoTaq® MDx Hot Start Polymerase | 100u | Promega |
E-8110 | ONE-Glo™ EX Luciferase Assay Sys | 10ml | Promega |
V6963 | UDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay Technical Manual | 4000 assays | Promega |
V9571 | ADP-Glo:trademark: Kinase Assay +MET Kinase Enzyme System | 1 each | Promega |
V6612 | GSH/GSSG-Glo™ Assay | 50ml | Promega |
H5131 | Tris Base, Molecular Biology Grade | 500g | Promega |
NV3261 | IGF1R-NanoLucFusion Vector | 20ug | Promega |
G7891 | CytoTox-ONE™ Homogeneous Membrane Int. Assay | 1000-4000 assays | Promega |
E6110 | ONE-Glo™ Luciferase Assay System | 10ml | Promega |
N1620 | Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay System | 100ml | Promega |
E1531 | Luciferase Cell Culture Lysis 5X Reagent | 30ml | Promega |
N2012 | Nano-Glo® Live Cell Assay System | 1000 assays | Promega |
G4511 | 25bp DNA Step Ladder | 100ug | Promega |
G9071 | NAD/NADH-Glo™ Assay | 10ml | Promega |
N4100 | Nano-Glo® Fluorofurimazine In Vivo Substrate (FFz) | 1each | Promega |
E2940 | Dual-Glo® 雙螢光素酶報告基因檢測系統 | 100ml | Promega |
VA1061 | Rapid-Digestion-Trypsin-and-Trypsin-LysC-Kits | 100ug | Promega |
V1501 | cAMP-Glo™ Assay | 300assays | Promega |
V4106 | DNA-PK Kinase Enzyme System | 10ug | Promega |
D1501 | Lambda DNA | 250mL/瓶 | Promega |
U1515 | dNTPMix | 1000ul | Promega |
G6420 | HDAC-GlorM |/ll Assays and Screening System | 10ml | Promega |
G6601 | HaloTEVProtease | 1000u | Promega |
MC5005 | Proteinase K (PK) Solution | 4ml | Promega |
VA1090 | GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay | 200assays | Promega |
A5000 | GoScript™ Reverse Transcription System | 50rxns | Promega |
V1921 | AMPK (A1/B1/G1) Kinase Enzyme System | 10ug | Promega |
V1961 | ERK2 Kinase Enzyme System | 10ug | Promega |
電話
微信
當前位置：
地址：上海浦東川沙鎮川沙路6619號上海起發實驗試劑有限公司
郵箱：xs1@78bio.com
傳真：021-50724961