一、公司介紹

DNA Polymerase Technology聚焦基因工程酶與PCR配套試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與推廣，團(tuán)隊(duì)具備多年分子酶改造、反應(yīng)體系優(yōu)化及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用落地經(jīng)驗(yàn)。公司以PCR技術(shù)應(yīng)用痛點(diǎn)為研發(fā)導(dǎo)向，依托基因修飾技術(shù)對(duì)天然DNA聚合酶進(jìn)行改造優(yōu)化，同時(shí)搭配緩沖液、增強(qiáng)劑、預(yù)混體系等配套產(chǎn)品，構(gòu)建完整的PCR試劑產(chǎn)品體系。

公司產(chǎn)品應(yīng)用場(chǎng)景覆蓋基礎(chǔ)分子生物學(xué)研究、臨床樣本核酸檢測(cè)、法醫(yī)物證分析、食品微生物篩查、環(huán)境污染物與病原微生物監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。針對(duì)不同樣本類(lèi)型、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度、實(shí)驗(yàn)精度要求、操作時(shí)效需求等差異化場(chǎng)景，公司開(kāi)發(fā)出多款功能細(xì)分的DNA聚合酶及配套試劑，兼顧常規(guī)實(shí)驗(yàn)與特殊樣本、特殊擴(kuò)增需求。在產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)節(jié)，公司執(zhí)行嚴(yán)格的質(zhì)量管控流程，從原料篩選、酶蛋白表達(dá)純化、試劑配制到成品分裝，每一個(gè)環(huán)節(jié)均設(shè)置多重檢測(cè)節(jié)點(diǎn)，保障不同批次產(chǎn)品性能保持穩(wěn)定，減少批次間差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的影響。同時(shí)，公司結(jié)合一線(xiàn)實(shí)驗(yàn)人員的反饋，持續(xù)迭代產(chǎn)品性能，優(yōu)化試劑使用體驗(yàn)，讓產(chǎn)品更好地適配各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)操作與特殊實(shí)驗(yàn)方案。

?? 下圖為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為美國(guó)DNA Polymerase Technology授權(quán)代理商的授權(quán)書(shū)

二、核心優(yōu)勢(shì)

1. 酶分子改造技術(shù)成熟，產(chǎn)品功能細(xì)分程度高

公司依托基因修飾技術(shù)對(duì)Taq、Klentaq等基礎(chǔ)DNA聚合酶進(jìn)行定點(diǎn)改造，通過(guò)改變酶蛋白的氨基酸序列，調(diào)整酶的耐熱性、延伸效率、抗抑制能力、保真度等核心性能。基于不同改造方向，公司劃分出高速擴(kuò)增、高保真擴(kuò)增、抗抑制劑、熱啟動(dòng)、兼具逆轉(zhuǎn)錄活性等多個(gè)產(chǎn)品系列，用戶(hù)可根據(jù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)短、樣本雜質(zhì)情況、實(shí)驗(yàn)精度要求、操作流程設(shè)計(jì)等條件，精準(zhǔn)選擇對(duì)應(yīng)產(chǎn)品，避免單一酶型無(wú)法適配多元實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景的問(wèn)題。

2. 適配復(fù)雜樣本，抗干擾能力表現(xiàn)良好

在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，血液、血清、土壤樣本、熒光染料處理樣本、食品粗提樣本等材料中含有大量PCR抑制劑，這類(lèi)物質(zhì)會(huì)抑制DNA聚合酶活性，導(dǎo)致擴(kuò)增條帶減弱、無(wú)條帶、非特異性擴(kuò)增等問(wèn)題。公司多款酶產(chǎn)品經(jīng)過(guò)多重突變改造，能夠耐受樣本中常見(jiàn)的抑制成分，部分產(chǎn)品可直接用于粗樣本擴(kuò)增，減少樣本純化步驟，縮短實(shí)驗(yàn)流程，同時(shí)降低樣本在純化過(guò)程中出現(xiàn)核酸損耗、交叉污染的概率。

3. 配套試劑體系，兼容性與適配性較強(qiáng)

除核心DNA聚合酶外，公司同步研發(fā)生產(chǎn)PCR增強(qiáng)劑混合液、專(zhuān)用緩沖體系、5×PCR試劑盒等配套產(chǎn)品。其中PCR增強(qiáng)劑混合液采用非甜菜堿配方，可與品牌旗下所有聚合酶搭配使用，也能適配市面多數(shù)同類(lèi)酶產(chǎn)品；專(zhuān)用緩沖體系針對(duì)不同酶的活性特點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化，能夠穩(wěn)定反應(yīng)體系的pH值、離子強(qiáng)度，為酶活性發(fā)揮提供適宜環(huán)境。完整的配套體系讓用戶(hù)無(wú)需額外搭配其他品牌試劑，減少試劑混用帶來(lái)的體系失衡問(wèn)題。

4. 熱啟動(dòng)技術(shù)路線(xiàn)多元，提升擴(kuò)增特異性

針對(duì)常規(guī)PCR反應(yīng)在室溫配制體系時(shí)，酶提前激活引發(fā)非特異性擴(kuò)增、引物二聚體過(guò)多等問(wèn)題，公司推出兩種不同原理的熱啟動(dòng)產(chǎn)品。一種為冷敏感突變型熱啟動(dòng)酶，通過(guò)基因突變讓酶在低溫環(huán)境下活性受到抑制，升溫至變性溫度后活性恢復(fù)，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)熱啟動(dòng)；另一種為核酸適配體結(jié)合型熱啟動(dòng)酶，利用適配體與酶可逆結(jié)合，低溫狀態(tài)下封閉酶活性，高溫后適配體脫離，酶正常工作。兩種技術(shù)路線(xiàn)的熱啟動(dòng)產(chǎn)品可滿(mǎn)足不同實(shí)驗(yàn)條件、不同操作習(xí)慣的用戶(hù)需求，有效提升PCR擴(kuò)增的特異性。

5. 產(chǎn)品穩(wěn)定性佳，儲(chǔ)存與使用門(mén)檻較低

公司在酶制劑與配套試劑中添加專(zhuān)用穩(wěn)定劑，在規(guī)定儲(chǔ)存條件下，產(chǎn)品可長(zhǎng)時(shí)間保持酶活性穩(wěn)定，減少因儲(chǔ)存不當(dāng)導(dǎo)致的酶活性下降問(wèn)題。同時(shí)，產(chǎn)品對(duì)常規(guī)PCR儀的溫度循環(huán)程序兼容性強(qiáng)，無(wú)需針對(duì)設(shè)備進(jìn)行特殊程序調(diào)試，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)操作人員按照標(biāo)準(zhǔn)流程即可完成實(shí)驗(yàn)，降低了產(chǎn)品的使用門(mén)檻。

6. 提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)支持，助力用戶(hù)解決實(shí)操難題

針對(duì)用戶(hù)在使用產(chǎn)品過(guò)程中遇到的擴(kuò)增異常、條帶不理想、體系優(yōu)化困難等問(wèn)題，品牌可提供定制化PCR故障排查服務(wù)，結(jié)合用戶(hù)的樣本類(lèi)型、反應(yīng)體系、擴(kuò)增程序等信息，分析問(wèn)題成因并給出調(diào)整方案，為實(shí)驗(yàn)順利開(kāi)展提供技術(shù)保障。

三、熱門(mén)產(chǎn)品介紹

（一）ZipTaq DNA Polymerase（高速DNA聚合酶）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

該產(chǎn)品為經(jīng)過(guò)定點(diǎn)突變改造的Taq型DNA聚合酶，核心特點(diǎn)是延伸速度較快，相比普通Taq酶，擴(kuò)增耗時(shí)大幅縮短。搭配品牌專(zhuān)屬優(yōu)化緩沖液使用時(shí)，可在短時(shí)間內(nèi)完成完整的PCR擴(kuò)增流程，優(yōu)化循環(huán)程序后，整體實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)可壓縮至較短區(qū)間。產(chǎn)品保留了良好的熱穩(wěn)定性，能夠耐受PCR變性階段的高溫環(huán)境，多次溫度循環(huán)后仍可維持穩(wěn)定的聚合活性。適用于常規(guī)短片段DNA擴(kuò)增、大批量樣本快速篩查等對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)效有要求的場(chǎng)景，擴(kuò)增產(chǎn)物可滿(mǎn)足電泳檢測(cè)、簡(jiǎn)單酶切分析等下游應(yīng)用。

2. 存儲(chǔ)條件

未開(kāi)封產(chǎn)品需放置在-20℃環(huán)境中避光密封保存；試劑開(kāi)封后，建議分裝為小規(guī)格體系，依舊在-20℃條件下儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品在-20℃環(huán)境下，活性可維持較長(zhǎng)周期；短期臨時(shí)存放可置于2-8℃環(huán)境，存放時(shí)長(zhǎng)不宜超過(guò)7天。運(yùn)輸過(guò)程中需采用低溫冷鏈運(yùn)輸，避免高溫環(huán)境造成酶活性損耗。

3. 工作原理

該酶屬于依賴(lài)模板的DNA聚合酶，具備5'→3'方向DNA聚合活性。在PCR反應(yīng)體系升溫至延伸溫度區(qū)間時(shí)，酶以體系中的單鏈DNA為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，以dNTP為原料，從引物的3'末端開(kāi)始逐步催化脫氧核苷酸連接，完成DNA子鏈的合成。基因突變改造提升了酶的底物結(jié)合效率與鏈延伸速率，以此實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)增。同時(shí)酶的熱穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)未被破壞，可承受多次高溫變性步驟，持續(xù)發(fā)揮催化作用。

4. 使用方法

第一步，試劑準(zhǔn)備與體系配制。將ZipTaq DNA Polymerase、配套10×反應(yīng)緩沖液、dNTP混合液、上下游引物、模板核酸、無(wú)酶純水等試劑置于冰盒上緩慢融解，融解后充分混勻并短暫離心，避免試劑殘留于管蓋或管壁。按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的反應(yīng)體系體積（常規(guī)體系為25μL或50μL），在冰浴環(huán)境下依次加入無(wú)酶純水、緩沖液、dNTP、引物、模板，最后加入ZipTaq酶，輕輕吹打混勻反應(yīng)體系，完成配制后短暫離心，將體系收集至管底。

第二步，PCR程序設(shè)置。將反應(yīng)管放入PCR儀，根據(jù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度設(shè)置溫度循環(huán)程序。常規(guī)程序參考：初始變性階段94℃保溫2分鐘；循環(huán)階段設(shè)置94℃變性15-30秒，55-65℃退火15-30秒，68-72℃延伸，每1kb擴(kuò)增片段對(duì)應(yīng)延伸時(shí)長(zhǎng)可根據(jù)酶的高速特性適當(dāng)縮短；循環(huán)次數(shù)設(shè)置為25-35次；循環(huán)結(jié)束后72℃終延伸5分鐘，最后將PCR儀溫度維持在4℃保存樣品。

第三步，產(chǎn)物檢測(cè)與后續(xù)處理。程序運(yùn)行結(jié)束后，取出反應(yīng)管，可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷擴(kuò)增效果，產(chǎn)物可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求開(kāi)展酶切、回收、測(cè)序等后續(xù)操作。

（二）Klentaq1 DNA Polymerase & Klentaq LA（長(zhǎng)片段高保真DNA聚合酶）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

Klentaq1為缺失5'外切酶活性的Taq衍生聚合酶，在此基礎(chǔ)上推出的Klentaq LA為長(zhǎng)片段精準(zhǔn)擴(kuò)增專(zhuān)用組合酶。兩款產(chǎn)品均提升了擴(kuò)增保真度，減少擴(kuò)增過(guò)程中堿基錯(cuò)配的概率；其中LA版本針對(duì)長(zhǎng)片段DNA擴(kuò)增進(jìn)行優(yōu)化，可穩(wěn)定擴(kuò)增較長(zhǎng)長(zhǎng)度的DNA片段，擴(kuò)增過(guò)程中不易出現(xiàn)片段斷裂、中途終止擴(kuò)增的情況。產(chǎn)品熱穩(wěn)定性?xún)?yōu)異，適配長(zhǎng)片段擴(kuò)增所需的較長(zhǎng)延伸時(shí)長(zhǎng)，適合基因克隆、長(zhǎng)片段測(cè)序、基因組片段分析等對(duì)擴(kuò)增長(zhǎng)度與序列準(zhǔn)確性有要求的實(shí)驗(yàn)。

2. 存儲(chǔ)條件

整體存儲(chǔ)要求與ZipTaq酶一致，未開(kāi)封產(chǎn)品長(zhǎng)期儲(chǔ)存需置于-20℃避光環(huán)境；開(kāi)封后建議分裝保存，減少反復(fù)凍融。2-8℃環(huán)境下臨時(shí)存放時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)7天。運(yùn)輸全程采用低溫冷鏈，避免溫度波動(dòng)影響酶的保真性能與聚合活性。

3. 工作原理

Klentaq1保留了5'→3' DNA聚合活性，去除了5'外切酶活性，減少了擴(kuò)增過(guò)程中對(duì)新生DNA鏈的降解作用，同時(shí)通過(guò)結(jié)構(gòu)優(yōu)化提升了堿基配對(duì)的識(shí)別精度，降低錯(cuò)配堿基的延伸概率，以此提升擴(kuò)增保真度。Klentaq LA在Klentaq1的基礎(chǔ)上搭配輔助因子，增強(qiáng)酶在長(zhǎng)片段模板上的持續(xù)合成能力，避免酶在長(zhǎng)鏈延伸過(guò)程中從模板上脫落，保障長(zhǎng)片段DNA完整合成。二者均遵循DNA半保留復(fù)制原理，依托堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)則完成模板指導(dǎo)下的DNA合成。

4. 使用方法

第一步，體系配制。在冰浴條件下配制PCR反應(yīng)體系，選用品牌配套的高保真專(zhuān)用緩沖液，按照25μL或50μL標(biāo)準(zhǔn)體系依次添加無(wú)酶純水、緩沖液、dNTP、上下游引物、模板DNA，最后加入Klentaq1或Klentaq LA酶，輕柔混勻后離心收集體系。針對(duì)長(zhǎng)片段模板，可適當(dāng)調(diào)整模板用量，避免模板濃度過(guò)高影響擴(kuò)增完整性。

第二步，擴(kuò)增程序設(shè)置。將反應(yīng)管放入PCR儀，根據(jù)片段長(zhǎng)度調(diào)整延伸時(shí)長(zhǎng)。基礎(chǔ)程序參考：初始變性94℃保溫3分鐘；循環(huán)階段94℃變性30秒，58-68℃退火30-45秒，72℃延伸，長(zhǎng)片段需按長(zhǎng)度足額設(shè)置延伸時(shí)間；循環(huán)次數(shù)控制在28-32次；終延伸72℃保溫10分鐘，4℃保存產(chǎn)物。長(zhǎng)片段擴(kuò)增可適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，減少堿基錯(cuò)配累積。

第三步，產(chǎn)物檢測(cè)與應(yīng)用。程序結(jié)束后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)條帶完整性與特異性，合格產(chǎn)物可用于載體連接、測(cè)序、片段回收等實(shí)驗(yàn)。

（三）Omni系列抗抑制劑DNA聚合酶（Omni Taq、Omni Klentaq）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

該系列產(chǎn)品為T(mén)aq與Klentaq的三重突變體，核心優(yōu)勢(shì)是對(duì)PCR抑制劑具備較強(qiáng)的耐受能力。可適配血液、血清、土壤浸出液、熒光染料處理樣本、食品粗提物等含有復(fù)雜雜質(zhì)的樣本，無(wú)需對(duì)樣本進(jìn)行深度純化，可直接作為模板開(kāi)展PCR擴(kuò)增。產(chǎn)品同時(shí)兼顧聚合活性與擴(kuò)增穩(wěn)定性，在抑制物存在的體系中，依舊可以產(chǎn)出清晰、特異性良好的擴(kuò)增條帶。可搭配品牌PCR增強(qiáng)劑混合液使用，進(jìn)一步提升在高抑制樣本中的擴(kuò)增成功率，廣泛應(yīng)用于臨床樣本檢測(cè)、環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)、食品檢測(cè)等場(chǎng)景。

2. 存儲(chǔ)條件

長(zhǎng)期儲(chǔ)存：-20℃避光密封保存；開(kāi)封后分裝存放，規(guī)避反復(fù)凍融。短期存放：2-8℃環(huán)境下不超過(guò)5天。運(yùn)輸采用低溫冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。該系列酶對(duì)輕微溫度波動(dòng)耐受度略高于普通Taq酶，但長(zhǎng)期不當(dāng)儲(chǔ)存仍會(huì)導(dǎo)致抗抑制能力與聚合活性下降。

3. 工作原理

酶分子經(jīng)過(guò)三重位點(diǎn)突變后，其空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，降低了樣本中抑制劑分子與酶活性中心結(jié)合的概率，避免抑制劑阻斷酶與模板、底物的結(jié)合。酶本身依舊保持完整的5'→3' DNA聚合活性，在適宜溫度下，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則催化DNA鏈合成。搭配PCR增強(qiáng)劑混合液時(shí)，增強(qiáng)劑可調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的離子環(huán)境與分子間作用力，進(jìn)一步削弱抑制劑的干擾作用，協(xié)同提升擴(kuò)增效果。

4. 使用方法

第一步，樣本處理與體系配制。針對(duì)血液、土壤等粗樣本，僅需完成簡(jiǎn)單離心去除大顆粒雜質(zhì)，無(wú)需核酸純化。在冰浴環(huán)境下配制體系，加入對(duì)應(yīng)Omni系列酶、配套緩沖液、dNTP、引物與粗樣本模板，若樣本抑制性較強(qiáng)，可按比例添加PCR增強(qiáng)劑混合液。體系混勻后離心，確保所有試劑集中于管底。

第二步，PCR程序設(shè)置。常規(guī)程序參考：初始變性94℃保溫2分鐘；循環(huán)階段94℃變性30秒，55-62℃退火30秒，72℃延伸30-60秒；循環(huán)次數(shù)30-38次；終延伸72℃保溫5分鐘，4℃保存。對(duì)于抑制性強(qiáng)的樣本，可適當(dāng)延長(zhǎng)變性時(shí)間，提升模板解鏈效果。

第三步，產(chǎn)物檢測(cè)。擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行電泳檢測(cè)，若條帶較弱，可結(jié)合實(shí)驗(yàn)情況微調(diào)模板用量或增強(qiáng)劑添加比例，重新開(kāi)展擴(kuò)增。

（四）OmniTaq 2 DNA Polymerase（兼具逆轉(zhuǎn)錄活性高速聚合酶）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

該產(chǎn)品為T(mén)aq酶的突變體（Taq D732N），聚合延伸速度較快，同時(shí)具備鏈置換活性與逆轉(zhuǎn)錄活性，實(shí)現(xiàn)單一酶同時(shí)完成逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增兩步反應(yīng)。可直接以RNA為模板，先催化RNA逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，再繼續(xù)催化cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，簡(jiǎn)化RT-PCR實(shí)驗(yàn)流程。產(chǎn)品耐受常規(guī)樣本雜質(zhì)，擴(kuò)增穩(wěn)定性良好，適用于RNA病毒檢測(cè)、基因表達(dá)分析、轉(zhuǎn)錄本擴(kuò)增等RT-PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

2. 存儲(chǔ)條件

-20℃避光長(zhǎng)期儲(chǔ)存，開(kāi)封后分裝保存，減少反復(fù)凍融；2-8℃臨時(shí)存放不超過(guò)7天。運(yùn)輸使用低溫冷鏈，RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)酶活性要求較高，需嚴(yán)格遵守存儲(chǔ)與運(yùn)輸溫度要求，避免逆轉(zhuǎn)錄活性受損。

3. 工作原理

該酶同時(shí)具備兩種核心活性：一是逆轉(zhuǎn)錄活性，在適宜溫度下，可識(shí)別RNA模板，以dNTP為原料，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則催化合成互補(bǔ)DNA（cDNA）；二是5'→3' DNA聚合活性，完成逆轉(zhuǎn)錄后，可繼續(xù)以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。同時(shí)酶保留鏈置換活性，在擴(kuò)增過(guò)程中可置換模板上的短片段核酸，保障復(fù)雜模板的順利擴(kuò)增。整體反應(yīng)在同一體系、同一套溫度循環(huán)程序中完成，無(wú)需中途添加試劑。

4. 使用方法

第一步，體系配制。全程在冰浴中操作，體系包含無(wú)酶純水、專(zhuān)用緩沖液、dNTP、上下游引物、RNA模板、OmniTaq 2酶。RNA易降解，操作過(guò)程中避免樣本接觸核酸酶，所有耗材均需為無(wú)酶無(wú)菌規(guī)格。體系混勻后短暫離心。

第二步，RT-PCR程序設(shè)置。程序分為逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增兩個(gè)階段，一體化運(yùn)行。參考程序：第一階段逆轉(zhuǎn)錄，42℃保溫20-30分鐘，完成RNA向cDNA的轉(zhuǎn)化；第二階段初始變性，94℃保溫2分鐘；第三階段循環(huán)擴(kuò)增，94℃變性30秒，56-64℃退火30秒，72℃延伸40秒，循環(huán)30-35次；第四階段終延伸72℃保溫5分鐘，4℃保存產(chǎn)物。

第三步，產(chǎn)物分析。取出反應(yīng)管，通過(guò)電泳、熒光定量等方式檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，完成基因表達(dá)檢測(cè)、病原核酸鑒定等實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>

（五）Cesium系列熱啟動(dòng)DNA聚合酶（冷敏感突變型）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

該系列為T(mén)aq、Klentaq酶的雙冷敏感突變體，依靠基因突變實(shí)現(xiàn)自動(dòng)熱啟動(dòng)效果。在室溫及低溫環(huán)境下，酶的聚合活性處于被抑制狀態(tài)，不會(huì)提前催化引物與模板結(jié)合產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物；當(dāng)體系升溫至PCR初始變性溫度后，酶的空間結(jié)構(gòu)恢復(fù)，活性解除并正常發(fā)揮催化作用。全程無(wú)需手動(dòng)添加酶、無(wú)需額外高溫激活步驟，簡(jiǎn)化熱啟動(dòng)操作流程。有效減少引物二聚體、非特異性條帶，提升擴(kuò)增特異性，適用于多重PCR、低豐度模板擴(kuò)增、對(duì)特異性要求較高的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

2. 存儲(chǔ)條件

長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-20℃避光環(huán)境，開(kāi)封后建議分裝為單次使用規(guī)格，杜絕反復(fù)凍融；2-8℃環(huán)境下臨時(shí)存放時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)7天。運(yùn)輸采用低溫冷鏈，低溫敏感特性決定其無(wú)法耐受常溫環(huán)境，需全程控溫。

3. 工作原理

酶分子經(jīng)過(guò)雙位點(diǎn)冷敏感突變后，在低溫（低于45℃）條件下，蛋白空間結(jié)構(gòu)發(fā)生折疊改變，活性中心被封閉，無(wú)法結(jié)合模板與底物，聚合活性受到抑制。當(dāng)體系溫度升高至90℃以上的變性溫度時(shí)，酶蛋白空間結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，活性中心開(kāi)放，具備完整的5'→3' DNA聚合活性，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成DNA鏈合成。整個(gè)熱啟動(dòng)過(guò)程依靠溫度變化自主觸發(fā)，無(wú)需外源抑制劑或人工干預(yù)。

4. 使用方法

第一步，體系配制。在室溫或冰浴環(huán)境下均可配制體系，按照標(biāo)準(zhǔn)PCR體系配比，依次加入無(wú)酶純水、熱啟動(dòng)專(zhuān)用緩沖液、dNTP、引物、模板核酸，最后加入Cesium系列熱啟動(dòng)酶，混勻后離心收集體系。低溫下酶活性被抑制，體系配制過(guò)程中不會(huì)發(fā)生預(yù)擴(kuò)增。

第二步，PCR程序設(shè)置。將反應(yīng)管放入PCR儀，設(shè)置常規(guī)熱啟動(dòng)PCR程序：初始變性94℃保溫2-3分鐘，該步驟同時(shí)完成模板變性與酶活性激活；循環(huán)階段94℃變性30秒，57-66℃退火30-45秒，72℃延伸，根據(jù)片段長(zhǎng)度調(diào)整時(shí)長(zhǎng)；循環(huán)次數(shù)28-36次；終延伸72℃保溫5分鐘，4℃保存。

第三步，產(chǎn)物檢測(cè)。程序結(jié)束后，通過(guò)電泳檢測(cè)擴(kuò)增條帶，該產(chǎn)品產(chǎn)出的條帶特異性較強(qiáng)，引物二聚體數(shù)量較少，可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

（六）RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系 & PCR Enhancer Cocktails（PEC，PCR增強(qiáng)劑混合液）

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

RockStart為通用型熱啟動(dòng)緩沖體系，不依賴(lài)酶本身的改造，可與市面絕大多數(shù)DNA聚合酶搭配使用，為任意聚合酶體系賦予熱啟動(dòng)效果。緩沖體系離子配比經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可穩(wěn)定反應(yīng)環(huán)境，提升擴(kuò)增穩(wěn)定性。

PCR Enhancer Cocktails（PEC）為非甜菜堿配方的PCR增強(qiáng)劑，專(zhuān)門(mén)針對(duì)含抑制劑的復(fù)雜模板設(shè)計(jì)。可調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的理化性質(zhì)，降低各類(lèi)抑制劑對(duì)DNA聚合酶的干擾，同時(shí)促進(jìn)高GC含量模板、二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜模板的雙鏈解離，提升擴(kuò)增效率與條帶亮度。兩款產(chǎn)品兼容性廣泛，既可搭配品牌旗下酶產(chǎn)品，也可配合其他品牌酶使用。

2. 存儲(chǔ)條件

兩款試劑均為緩沖液類(lèi)液態(tài)產(chǎn)品，長(zhǎng)期儲(chǔ)存需置于-20℃環(huán)境；開(kāi)封后可在2-8℃環(huán)境下存放，存放時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)1個(gè)月，避免長(zhǎng)時(shí)間敞口放置導(dǎo)致組分揮發(fā)、污染。運(yùn)輸采用常規(guī)低溫運(yùn)輸即可。

3. 工作原理

RockStart緩沖體系中含有溫度響應(yīng)型活性調(diào)控組分，低溫狀態(tài)下，組分與DNA聚合酶可逆結(jié)合，封閉酶活性，阻止室溫下的非特異性擴(kuò)增；當(dāng)體系升溫至變性溫度后，調(diào)控組分與酶分離，酶活性正常釋放，實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)功能。同時(shí)緩沖液中的鹽離子、穩(wěn)定劑可維持體系pH與離子強(qiáng)度，保障酶活性穩(wěn)定。

PEC增強(qiáng)劑通過(guò)調(diào)節(jié)體系滲透壓、分子間作用力，削弱樣本中抑制劑分子與酶、核酸的結(jié)合能力；同時(shí)降低DNA雙鏈解鏈所需的能量，幫助高GC、高二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板完成解鏈，讓引物順利結(jié)合模板，進(jìn)而提升擴(kuò)增成功率。

4. 使用方法

RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系：配制PCR體系時(shí)，直接用該緩沖液替代常規(guī)10×PCR緩沖液，按照體系比例添加，后續(xù)引物、酶、模板等試劑添加流程與常規(guī)PCR一致，配套任意聚合酶均可實(shí)現(xiàn)熱啟動(dòng)效果，程序設(shè)置與熱啟動(dòng)PCR標(biāo)準(zhǔn)程序相同。

PEC PCR增強(qiáng)劑混合液：根據(jù)樣本抑制程度確定添加比例，常規(guī)抑制樣本按體系總體積的5%-10%添加，高抑制樣本可適當(dāng)提高比例。在配制體系時(shí)，將增強(qiáng)劑與緩沖液、dNTP等試劑一同加入，其余操作流程不變，搭配抗抑制劑酶使用時(shí)，可進(jìn)一步提升復(fù)雜樣本的擴(kuò)增效果。

四、產(chǎn)品可解決實(shí)驗(yàn)中哪些問(wèn)題

結(jié)合分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室PCR實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)故障與難點(diǎn)，DNA Polymerase Technology全系列產(chǎn)品可針對(duì)性解決多類(lèi)實(shí)操問(wèn)題，覆蓋模板、酶活性、反應(yīng)體系、擴(kuò)增特異性、實(shí)驗(yàn)效率等多個(gè)維度，具體分類(lèi)如下：

1. 解決樣本含抑制劑導(dǎo)致的擴(kuò)增失敗問(wèn)題

血液、血清、組織粗提液、土壤、食品樣本等材料中含有的多酚、多糖、血紅蛋白、重金屬離子等物質(zhì)，會(huì)結(jié)合DNA聚合酶活性中心，抑制酶的催化功能，最終出現(xiàn)無(wú)擴(kuò)增條帶、條帶模糊、條帶缺失等現(xiàn)象。Omni系列抗抑制劑聚合酶搭配PEC增強(qiáng)劑混合液，可耐受這類(lèi)抑制物質(zhì)，無(wú)需深度純化樣本，直接開(kāi)展擴(kuò)增，解決因樣本雜質(zhì)引發(fā)的實(shí)驗(yàn)失敗問(wèn)題。

2. 解決室溫配制體系引發(fā)的非特異性擴(kuò)增問(wèn)題

常規(guī)DNA聚合酶在室溫下即可發(fā)揮活性，配制PCR體系過(guò)程中，酶會(huì)提前催化引物與模板非特異性結(jié)合，生成大量引物二聚體、雜帶，干擾目標(biāo)條帶檢測(cè)。Cesium冷敏感突變熱啟動(dòng)酶、RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系，可在低溫下抑制酶活性，僅在高溫變性階段激活酶，從源頭減少非特異性產(chǎn)物，提升擴(kuò)增條帶的清晰度與特異性。

3. 解決長(zhǎng)片段DNA擴(kuò)增中途終止、條帶斷裂問(wèn)題

普通Taq酶持續(xù)合成能力有限，擴(kuò)增較長(zhǎng)片段DNA時(shí)，容易從模板上脫落，導(dǎo)致擴(kuò)增片段不完整、條帶彌散。Klentaq LA長(zhǎng)片段專(zhuān)用聚合酶優(yōu)化了酶的持續(xù)合成能力，可穩(wěn)定完成長(zhǎng)片段DNA的全程擴(kuò)增，保障長(zhǎng)片段產(chǎn)物的完整性，滿(mǎn)足基因克隆、長(zhǎng)片段測(cè)序等實(shí)驗(yàn)需求。

4. 解決常規(guī)擴(kuò)增耗時(shí)久、大批量樣本效率低問(wèn)題

傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增流程整體時(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室需要處理大批量篩查樣本時(shí)，實(shí)驗(yàn)效率難以提升。ZipTaq高速聚合酶延伸速率較快，搭配專(zhuān)屬緩沖液可大幅縮短擴(kuò)增循環(huán)時(shí)長(zhǎng)，在保證擴(kuò)增效果的前提下，壓縮整體實(shí)驗(yàn)周期，提升大批量樣本的處理效率。

5. 解決RNA樣本實(shí)驗(yàn)流程繁瑣、多酶聯(lián)用成本高問(wèn)題

傳統(tǒng)RT-PCR需要分別使用逆轉(zhuǎn)錄酶與DNA聚合酶，分兩步完成反應(yīng)，操作步驟多，且兩種酶混用容易出現(xiàn)體系適配問(wèn)題。OmniTaq 2兼具逆轉(zhuǎn)錄與DNA聚合雙重活性，單一酶即可完成RNA逆轉(zhuǎn)錄與cDNA擴(kuò)增，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程，減少試劑種類(lèi)與操作步驟，同時(shí)降低試劑混用帶來(lái)的體系失衡風(fēng)險(xiǎn)。

6. 解決高GC、復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)模板擴(kuò)增困難問(wèn)題

部分基因片段GC占比較高，或存在復(fù)雜的發(fā)夾、莖環(huán)等二級(jí)結(jié)構(gòu)，DNA雙鏈難以解鏈，引物無(wú)法正常結(jié)合模板，最終導(dǎo)致擴(kuò)增條帶極弱或無(wú)條帶。PEC PCR增強(qiáng)劑可輔助這類(lèi)模板完成雙鏈解鏈，降低二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，配合品牌聚合酶使用，提升高GC、復(fù)雜結(jié)構(gòu)模板的擴(kuò)增成功率。

7. 解決擴(kuò)增過(guò)程中堿基錯(cuò)配率高、產(chǎn)物序列失真問(wèn)題

普通Taq酶缺乏3'→5'外切酶校對(duì)活性，擴(kuò)增過(guò)程中容易出現(xiàn)堿基錯(cuò)配，若產(chǎn)物用于測(cè)序、定點(diǎn)突變、載體構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真、載體構(gòu)建失敗。Klentaq1及Klentaq LA聚合酶優(yōu)化了堿基識(shí)別精度，降低錯(cuò)配堿基的延伸概率，提升擴(kuò)增保真度，保障擴(kuò)增產(chǎn)物的序列準(zhǔn)確性。

8. 解決不同品牌酶與緩沖液兼容性差的問(wèn)題

實(shí)驗(yàn)室常會(huì)混用不同品牌的聚合酶與緩沖液，由于離子配比、pH值差異，容易出現(xiàn)酶活性下降、擴(kuò)增效果不穩(wěn)定等問(wèn)題。RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系、PEC增強(qiáng)劑具備良好的通用性，可與多數(shù)市售DNA聚合酶兼容，減少試劑混用帶來(lái)的適配問(wèn)題，降低實(shí)驗(yàn)室試劑選型與搭配難度。

9. 解決酶儲(chǔ)存不當(dāng)、反復(fù)凍融導(dǎo)致活性快速下降問(wèn)題

實(shí)驗(yàn)室試劑反復(fù)凍融、儲(chǔ)存溫度波動(dòng)，會(huì)造成DNA聚合酶活性逐步降低，出現(xiàn)批次間擴(kuò)增效果差異大的問(wèn)題。品牌全系產(chǎn)品均添加專(zhuān)用穩(wěn)定劑，在合規(guī)儲(chǔ)存條件下，酶活性衰減速度較慢；同時(shí)產(chǎn)品分裝使用門(mén)檻低，配合規(guī)范的儲(chǔ)存方式，可進(jìn)一步緩解反復(fù)凍融帶來(lái)的活性損耗，保障不同批次、不同使用階段的產(chǎn)品穩(wěn)定性。

五、購(gòu)買(mǎi)此公司的產(chǎn)品會(huì)有哪些疑問(wèn)和解答

（一）采購(gòu)相關(guān)疑問(wèn)

1. 問(wèn)：國(guó)內(nèi)如何正規(guī)購(gòu)買(mǎi)該品牌產(chǎn)品，采購(gòu)周期大概多久？

答：上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司為該品牌授權(quán)代理商，國(guó)內(nèi)用戶(hù)可直接與該代理商對(duì)接完成采購(gòu)。常規(guī)常備產(chǎn)品，代理商倉(cāng)庫(kù)有現(xiàn)貨，下單后1-3個(gè)工作日內(nèi)安排發(fā)貨；部分定制化規(guī)格、非常規(guī)產(chǎn)品，需要從海外調(diào)配貨源，采購(gòu)周期根據(jù)庫(kù)存情況有所不同，代理商售前人員會(huì)提前告知具體到貨時(shí)長(zhǎng)。

2. 問(wèn)：產(chǎn)品是否支持小規(guī)格試用裝采購(gòu)，初次使用能否申請(qǐng)技術(shù)指導(dǎo)？

答：品牌提供部分主流產(chǎn)品的小規(guī)格試用裝，用戶(hù)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求向上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司申請(qǐng)。針對(duì)初次使用該品牌產(chǎn)品的用戶(hù)，代理商可提供基礎(chǔ)技術(shù)指導(dǎo)，包括產(chǎn)品選型建議、體系配比參考、基礎(chǔ)程序設(shè)置等內(nèi)容；若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到復(fù)雜問(wèn)題，還可對(duì)接品牌專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員獲取故障排查方案。

3. 問(wèn)：采購(gòu)批量較大時(shí)，是否有配套的優(yōu)惠政策，能否開(kāi)具票？

答：針對(duì)批量采購(gòu)的企業(yè)、科研院所、大型實(shí)驗(yàn)室，上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司會(huì)根據(jù)采購(gòu)數(shù)量、產(chǎn)品品類(lèi)制定對(duì)應(yīng)的優(yōu)惠方案，具體可與商務(wù)人員溝通確認(rèn)。所有采購(gòu)訂單均可開(kāi)具符合財(cái)務(wù)規(guī)范的票，發(fā)票品類(lèi)包含試劑類(lèi)相關(guān)類(lèi)目，滿(mǎn)足各類(lèi)單位的財(cái)務(wù)報(bào)銷(xiāo)要求。

（二）運(yùn)輸與儲(chǔ)存相關(guān)疑問(wèn)

1. 問(wèn)：DNA聚合酶類(lèi)產(chǎn)品運(yùn)輸是否會(huì)影響活性，運(yùn)輸過(guò)程采用什么方式？

答：品牌旗下DNA聚合酶、緩沖液、增強(qiáng)劑等產(chǎn)品均采用低溫冷鏈運(yùn)輸，全程使用冷藏箱搭配低溫冷媒控溫，嚴(yán)格遵循產(chǎn)品運(yùn)輸溫度要求。常規(guī)運(yùn)輸時(shí)長(zhǎng)內(nèi)，冷鏈環(huán)境可保障酶活性不受影響。若收到貨物時(shí)發(fā)現(xiàn)冷鏈包裝破損、冷媒全融化、產(chǎn)品溫度異常，可第一時(shí)間聯(lián)系代理商售后人員處理。

2. 問(wèn)：產(chǎn)品收到后未及時(shí)使用，臨時(shí)存放需要注意哪些事項(xiàng)？

答：所有酶類(lèi)產(chǎn)品、PEC增強(qiáng)劑、RockStart緩沖體系，短期臨時(shí)存放均需放置在2-8℃冰箱中，酶類(lèi)產(chǎn)品存放時(shí)長(zhǎng)不可超過(guò)7天，緩沖液類(lèi)產(chǎn)品存放時(shí)長(zhǎng)不可超過(guò)1個(gè)月。臨時(shí)存放時(shí)務(wù)必?cái)Q緊管蓋、瓶蓋，避免試劑揮發(fā)、外界雜質(zhì)污染；嚴(yán)禁將酶類(lèi)產(chǎn)品置于常溫環(huán)境長(zhǎng)時(shí)間放置，也不可放入-80℃冰箱，過(guò)低溫度不會(huì)提升穩(wěn)定性，還可能導(dǎo)致試劑體系發(fā)生變化。

3. 問(wèn)：產(chǎn)品開(kāi)封后分裝保存，反復(fù)凍融多少次內(nèi)不會(huì)明顯影響活性？

答：品牌全系DNA聚合酶經(jīng)過(guò)穩(wěn)定劑優(yōu)化，在規(guī)范分裝的前提下，反復(fù)凍融次數(shù)控制在5次以?xún)?nèi)，酶的聚合活性、抗抑制能力、熱啟動(dòng)特性不會(huì)出現(xiàn)明顯下降。建議用戶(hù)收到大包裝產(chǎn)品后，根據(jù)日常單次使用體積，分裝為小規(guī)格離心管，每管對(duì)應(yīng)一次實(shí)驗(yàn)用量，做到“一次分裝、單次使用"，從根本上規(guī)避反復(fù)凍融問(wèn)題。緩沖液、增強(qiáng)劑類(lèi)產(chǎn)品開(kāi)封后無(wú)需頻繁凍融，2-8℃密封存放即可。

（三）產(chǎn)品選型與搭配疑問(wèn)

1. 問(wèn)：初次使用，不清楚自身實(shí)驗(yàn)該選擇哪一款聚合酶，如何快速選型？

答：可根據(jù)樣本類(lèi)型、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度、實(shí)驗(yàn)精度要求、是否需要RNA擴(kuò)增、擴(kuò)增特異性要求五個(gè)核心維度判斷：常規(guī)純核酸樣本、追求實(shí)驗(yàn)速度，選擇ZipTaq高速聚合酶；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度較長(zhǎng)、需要高序列準(zhǔn)確性，選擇Klentaq LA；樣本為血液、土壤、食品等含抑制劑的粗樣本，選擇Omni系列抗抑制劑聚合酶；需要同時(shí)完成RNA逆轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增，選擇OmniTaq 2；對(duì)擴(kuò)增特異性要求高、容易出現(xiàn)雜帶、引物二聚體，選擇Cesium熱啟動(dòng)酶或搭配RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系。也可將實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)告知上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司技術(shù)人員，由專(zhuān)業(yè)人員協(xié)助選型。

2. 問(wèn)：不同系列的聚合酶能否互相搭配使用，同一款酶能否混用其他品牌緩沖液？

答：品牌旗下不同系列聚合酶不建議混合添加至同一反應(yīng)體系，不同酶的活性條件、延伸特性存在差異，混用會(huì)打破反應(yīng)體系平衡，導(dǎo)致擴(kuò)增效果異常。同一款聚合酶可搭配其他品牌常規(guī)PCR緩沖液，但由于不同品牌緩沖液離子配比、pH值不同，可能出現(xiàn)酶活性下降、擴(kuò)增條帶變?nèi)醯葐?wèn)題。優(yōu)先推薦使用品牌配套緩沖液、增強(qiáng)劑，體系適配性最佳；若需混用其他品牌緩沖液，建議先開(kāi)展小試，驗(yàn)證擴(kuò)增效果后再批量使用。

3. 問(wèn)：PEC增強(qiáng)劑是否必須搭配品牌抗抑制劑酶使用，搭配普通Taq酶是否有效？

答：PEC增強(qiáng)劑并非專(zhuān)屬試劑，可搭配市面上絕大多數(shù)普通Taq酶、高保真聚合酶使用。搭配品牌Omni系列抗抑制劑酶時(shí)，二者協(xié)同作用，對(duì)高抑制樣本的優(yōu)化效果更為突出；搭配普通Taq酶時(shí)，也可在一定程度上削弱樣本抑制劑的干擾，改善高GC模板擴(kuò)增效果，但整體提升幅度會(huì)略低于與品牌專(zhuān)用酶的組合。

（四）實(shí)驗(yàn)操作與體系配制疑問(wèn)

1. 問(wèn)：配制反應(yīng)體系時(shí)，試劑的添加順序是否會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有無(wú)標(biāo)準(zhǔn)順序？

答：試劑添加順序會(huì)輕微影響體系穩(wěn)定性，建議遵循“先加水與緩沖液，再加底物、引物、模板，最后添加DNA聚合酶"的標(biāo)準(zhǔn)順序。先加入基礎(chǔ)液相體系，可讓緩沖液充分分散，穩(wěn)定體系環(huán)境；最后加入酶，可減少酶在純液相、無(wú)模板狀態(tài)下的空轉(zhuǎn)消耗，同時(shí)對(duì)于熱啟動(dòng)酶以外的普通酶，可縮短酶在室溫下的游離時(shí)間，減少預(yù)擴(kuò)增。體系配制全程建議在冰浴環(huán)境下操作。

2. 問(wèn)：使用熱啟動(dòng)酶時(shí)，是否還需要手動(dòng)高溫激活，初始變性時(shí)間需要延長(zhǎng)嗎？

答：品牌Cesium冷敏感突變熱啟動(dòng)酶、搭配RockStart緩沖體系的反應(yīng)體系，無(wú)需手動(dòng)高溫激活。初始變性階段設(shè)置94℃保溫2分鐘即可，該時(shí)長(zhǎng)既可以完成模板DNA的充分變性，也能同步完成酶活性的自主激活，無(wú)需額外延長(zhǎng)保溫時(shí)間。過(guò)度延長(zhǎng)初始變性時(shí)間，反而會(huì)加速酶活性衰減。

3. 問(wèn)：使用Omni系列酶擴(kuò)增血液樣本，血液的添加比例有明確限制嗎？

答：血液樣本直接擴(kuò)增時(shí)，在常規(guī)25μL反應(yīng)體系中，抗凝全血的添加體積建議控制在1-2μL，占體系總體積的5%以?xún)?nèi)。若添加比例過(guò)高，樣本中的抑制物質(zhì)總量增加，會(huì)超出酶的耐受范圍，依舊出現(xiàn)擴(kuò)增條帶減弱的問(wèn)題；若添加比例過(guò)低，模板核酸總量不足，會(huì)導(dǎo)致條帶偏淡。不同濃度的血液樣本可通過(guò)梯度添加比例小試，確定最佳用量。

（五）擴(kuò)增異常與故障排查疑問(wèn)

1. 問(wèn)：使用產(chǎn)品后出現(xiàn)無(wú)擴(kuò)增條帶的情況，優(yōu)先排查哪些環(huán)節(jié)？

答：出現(xiàn)無(wú)條帶問(wèn)題，按照從易到難的順序逐步排查：第一，檢查試劑狀態(tài)，確認(rèn)DNA聚合酶是否因儲(chǔ)存不當(dāng)失活，可使用已知合格模板做陽(yáng)性對(duì)照，驗(yàn)證酶活性；第二，檢查模板質(zhì)量，確認(rèn)模板核酸是否降解、濃度過(guò)低，粗樣本需排查雜質(zhì)是否超標(biāo)；第三，檢查反應(yīng)體系配比，確認(rèn)dNTP、引物、Mg2?等關(guān)鍵組分是否漏加、比例錯(cuò)誤；第四，檢查PCR儀程序與溫控，確認(rèn)變性、退火、延伸溫度設(shè)置無(wú)誤，儀器實(shí)際溫度與顯示溫度是否存在偏差；第五，對(duì)于RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)，重點(diǎn)排查RNA模板是否被核酸酶降解。

2. 問(wèn)：擴(kuò)增條帶清晰，但同時(shí)伴隨大量引物二聚體，該如何調(diào)整？

答：引物二聚體過(guò)多主要是低溫下引物非特異性結(jié)合導(dǎo)致。優(yōu)先更換Cesium熱啟動(dòng)酶或搭配RockStart熱啟動(dòng)緩沖體系，從源頭抑制室溫下的引物結(jié)合；其次，可適當(dāng)提高退火溫度，縮小引物非特異性配對(duì)的概率；也可適當(dāng)減少引物添加量，降低引物分子間碰撞結(jié)合的概率；同時(shí)縮短循環(huán)次數(shù)，避免引物二聚體大量累積。

3. 問(wèn)：長(zhǎng)片段擴(kuò)增時(shí)出現(xiàn)條帶彌散、片段斷裂，調(diào)整哪些參數(shù)可以改善？

答：該問(wèn)題主要與酶的持續(xù)合成能力、延伸時(shí)長(zhǎng)、模板完整性相關(guān)。首先，確認(rèn)選用的酶型是否為Klentaq LA長(zhǎng)片段專(zhuān)用聚合酶，普通Taq類(lèi)酶不適合長(zhǎng)片段擴(kuò)增；其次，按照片段長(zhǎng)度足額延長(zhǎng)延伸時(shí)間，每1kb片段保證對(duì)應(yīng)的延伸時(shí)長(zhǎng)，避免延伸不充分；再次，檢查模板DNA是否存在降解，重新提取完整的模板核酸；最后，適當(dāng)降低PCR循環(huán)次數(shù)，減少擴(kuò)增過(guò)程中核酸片段的損傷累積。

（六）售后與質(zhì)保相關(guān)疑問(wèn)

1. 問(wèn)：產(chǎn)品收到后發(fā)現(xiàn)酶活性異常、擴(kuò)增效果不達(dá)標(biāo)，是否支持退換貨？

答：上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為授權(quán)代理商，嚴(yán)格執(zhí)行產(chǎn)品質(zhì)保政策。用戶(hù)收到產(chǎn)品后，在合規(guī)儲(chǔ)存、未超保質(zhì)期、嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作的前提下，若產(chǎn)品出現(xiàn)酶活性缺失、性能不達(dá)標(biāo)等質(zhì)量問(wèn)題，憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、產(chǎn)品包裝、訂單信息，可聯(lián)系代理商售后人員辦理退換貨事宜。若因用戶(hù)儲(chǔ)存不當(dāng)、操作失誤、人為損壞等原因?qū)е碌漠a(chǎn)品失效，不在退換貨范圍內(nèi)。

2. 問(wèn)：產(chǎn)品超出保質(zhì)期后，外觀無(wú)變化，還能否繼續(xù)使用？

答：不建議使用超出保質(zhì)期的產(chǎn)品。產(chǎn)品保質(zhì)期是基于大量穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)確定的安全使用周期，超過(guò)保質(zhì)期后，DNA聚合酶的活性、抗抑制能力、保真度等核心性能會(huì)逐步衰減，且衰減速度無(wú)固定規(guī)律，即使試劑外觀、顏色、濁度無(wú)明顯變化，也無(wú)法保障擴(kuò)增結(jié)果的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確性，繼續(xù)使用會(huì)大幅增加實(shí)驗(yàn)失敗概率。

3. 問(wèn)：實(shí)驗(yàn)遇到復(fù)雜故障，自行排查無(wú)果，能否申請(qǐng)品牌專(zhuān)屬技術(shù)支持？

答：可以申請(qǐng)專(zhuān)屬技術(shù)支持。用戶(hù)可先對(duì)接上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司的技術(shù)人員，詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景、樣本類(lèi)型、反應(yīng)體系、擴(kuò)增程序、產(chǎn)物檢測(cè)結(jié)果、已經(jīng)嘗試過(guò)的調(diào)整方案等信息。常規(guī)問(wèn)題可由代理商技術(shù)人員直接解答；針對(duì)復(fù)雜、疑難的PCR故障，代理商可協(xié)助對(duì)接品牌原廠技術(shù)團(tuán)隊(duì)，提供定制化的故障排查方案與實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建議。

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更多產(chǎn)品信息，請(qǐng)聯(lián)系美國(guó)DNA Polymerase Technology授權(quán)代理商：上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

（注：本文內(nèi)容基于品牌公開(kāi)資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）

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